用FAB-MS/MS对γB-晶体蛋白非酶糖基化位点的研究

摘要

目的鉴定γＢ－晶体蛋白非酶糖基化位点。方法用离子交换ＨＰＬＣ纯化小牛晶状体γＢ－晶体蛋白，与果糖保温后用糜蛋白酶水解。糖基化的肽用Ａｆｉ－Ｇｅｌ６０１柱层析纯化，并用ＲＰ－ＨＰＬＣ分离各肽。用ＥＳＩＭＳ和ＦＡＢ－ＭＳ／ＭＳ分析糖基化肽的糖基化位点。结果用Ａｆｉ－Ｇｅｌ～６０１和ＲＰ－ＨＰＬＣ纯化获得２个肽段，分别为γＢ－晶体蛋白１－５和１－６残基的肽段。ＦＡＢ－ＭＳ／ＭＳ分析的结果显示，有４个表示Ｎ－末端氨基糖基化的峰，而仅发现２个非常小的表示Ｌｙｓ－２糖基化的峰。结论γＢ－晶体蛋白非酶糖基化的主要位点在Ｎ－末端的α－氨基。Ｌｙｓ－２的ε－氨基亦被糖基化。