腺苷预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中微RNA-29b及凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2、磷酸化蛋白激酶B、人髓细胞白血病1表达的影响

摘要

目的 观察腺苷预处理(AP)对大鼠脑缺血再灌注(IR)后脑组织中微RNA-29b(miR-29b)及凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、人髓细胞白血病1(Mcl-1)表达的影响,探讨AP对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护作用及机制.方法 将健康雄性清洁级Sprague Dawley大鼠135只随机分为假手术组、IR组、AP组,每组45只.AP组大鼠在手术前3 d腹腔注射2 mL腺苷注射液(1.5 mg·kg-1),每日1次;假手术组和IR组大鼠在手术前3 d每日相同时间点腹腔注射2 mL生理盐水.IR组及AP组大鼠采用改良线栓法行脑中动脉栓塞并于栓塞2 h后拨出栓线恢复血供制备IR模型,假手术组大鼠不做颈动脉结扎,其余手术方法同IR组和AP组.根据5分制神经行为学评分标准对大鼠进行神经功能损伤评分;术后24 h分别取各组造模成功大鼠,断头处死,应用氯化三苯四氮唑染色法观察脑梗死情况,并计算脑梗死体积占比;苏木精-伊红染色观察大鼠海马区神经元细胞存活情况,实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组大鼠海马组织内miR-29b表达,Western blot法检测大鼠海马组织中Bcl-2、p-Akt、Mcl-1表达.结果 假手术组、IR组和AP组大鼠神经行为学评分和脑梗死体积占比比较差异有统计学意义(F=186.500、191.300,P0.05);IR组大鼠手术后2、6、24 h海马组织miR-29b相对表达量呈增高趋势,手术后48 h开始降低(P0.05);IR组和AP组大鼠手术后2、6、24 h脑组织Bcl-2、Mcl-1和p-Akt相对表达量呈显著增高趋势(P0.05);AP组大鼠手术后2、6、24、48 h海马组织Mcl-1相对表达量显著高于IR组(P<0.05).IR组大鼠手术后2、6、24、48 h海马组织p-Akt相对表达量显著高于假手术组(P<0.05);AP组大鼠手术后2、6、24 h海马组织p-Akt相对表达量显著高于假手术组,手术后48 h海马组织p-Akt相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);AP组大鼠手术后2、6、24、48 h海马组织p-Akt相对表达量显著低于IR组(P<0.05).结论 AP可上调大鼠脑IR后miR-29b的表达,miR-29b通过下调海马组织中Akt蛋白的磷酸化水平、促进抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达来调控细胞凋亡,从而发挥对CIRI的保护作用.