沉默信号调节蛋白6在溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中的表达及意义

摘要

探讨沉默信号调节蛋白(SIRT)6在溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中的表达及意义.方法将22只14日龄清洁级无病原体C57BL6/J野生型(WT)小鼠分为WT对照组(n=6)和WT-葡聚糖硫酸钠(WT-DSS)组(n=16),将13只肠道上皮细胞敲除SIRT6基因(SIRT6IKO)小鼠分为SIRT6IKO对照组(n=3)和SIRT6IKO-DSS组(n=10).WT对照组和SIRT6IKO对照组小鼠给予正常蒸馏水喂养,WT-DSS组和SIRT6IKO-DSS组小鼠给予25 g·L-1 DSS间断性喂养(每日5 mL,连续7 d,然后更换正常饮用水喂养14 d为1个循环,共3个循环)建立UC模型.每天称小鼠体质量,观察小鼠大便性状、肉眼血便,计算小鼠疾病活动度指数(DAI)评分.于造模第3个循环末,将各组小鼠采用颈椎脱臼法处死,取新鲜结肠组织,应用苏木精-伊红(HE)染色观察WT-DSS组和SIRT6IKO-DSS组小鼠结肠黏膜损伤的病理学变化并进行评分,Western blot法检测WT对照组,SIRT6 IKO对照组和WT-DSS组小鼠结肠组织中SIRT6蛋白表达来判断基因敲除效率,免疫组织化学法检测WT-DSS组和SIRT6 IKO-DSS组小鼠结肠组织中巨噬细胞特异性标志物F4/80的表达,实时荧光定量聚合酶链反应法检测WT-DSS组和SIRT6 IKO-DSS组小鼠结肠组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平.结果SIRT6 IKO对照组小鼠结肠组织中SIRT6蛋白相对表达量显著高于WT对照组(P0.05);造模第1、2个循环末,SIRT6IKO-DSS组与WT-DSS组小鼠体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);造模第3个循环末,SIRT6IKO-DSS组小鼠体质量显著低于WT-DSS组(P0.05);造模第2个循环末,SIRT6IKO-DSS组小鼠DAI评分显著高于第1个循环末(P<0.05);造模第2、3个循环末,SIRT6IKO-DSS组小鼠DAI评分显著高于WT-DSS组(P<0.05).SIRT6IKO-DSS组小鼠结肠组织组织学损伤指数显著低于WT-DSS组(P<0.05).SIRT6IKO-DSS组小鼠结肠组织F4/80表达评分显著高于WT-DSS组(P<0.05).SIRT6IKO-DSS组小鼠结肠组织中IL-6、TNF-αmRNA相对表达量显著高于WT-DSS组(P<0.05).结论UC小鼠结肠组织中SIRT6呈低表达,结肠组织中SIRT6缺失会加重结肠组织的炎症反应和损伤,增加UC易感性.