不同核心启动子对中国仓鼠卵巢细胞重组蛋白表达的影响

摘要

目的 探讨不同核心启动子对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞重组蛋白表达的影响.方法 以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,分别构建以巨细胞病毒(CMV)启动子、Natural CMV启动子、超级核心启动子(SCP)2和SCP3驱动的表达载体并转染CHO细胞,根据转染表达载体的不同将细胞分为对照组、Natural CMV组、SCP2组和SCP3组.应用荧光倒置显微镜观察报告基因EGFP的瞬时转染效率,流式细胞术检测各组第1代和第30代细胞中EGFP表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组第30代细胞中EGFP mRNA相对表达量.结果 对照组、Natural CMV组、SCP2组细胞的瞬时转染效率比较差异无统计学意义(P>0.05);SCP3组细胞的瞬时转染效率显著高于对照组(P0.05),对照组、Natural CMV组、SCP2组第30代多克隆细胞中EGFP表达水平两两比较差异无统计学意义(P>0.05),SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP表达水平显著高于对照组、Natural CMV组和SCP2(P0.05),SCP2组、SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量显著高于对照组、Natural CMV组(P<0.05),SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量显著高于SCP2组(P<0.05).结论 SCP3能够显著提高CHO细胞中重组蛋白的表达及稳定性.