NSCLC患者尿液中游离miRNAs qPCR内参基因的选择

摘要

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者和健康志愿者尿液中微小RNA(miRNA)内参基因的稳定性。方法分别收集NSCLC患者(12名)和健康志愿者(7名)尿液样本,经膜浓缩过滤后提取其中的总RNA。通过BGISEQ-500 miRNA建库和二代测序技术(NGS)测定尿液样本中miRNA的表达谱,基于测序表达量(transcript per million, TPM)值筛选出前5个高丰度的候选内参基因,包括常用的内参基因U6,通过实时荧光定量PCR(qPCR)技术在另一组样本中进行验证。利用geNorm软件、NormFinder软件和BestKeeper软件评价候选内参基因表达的稳定性。结果 geNorm软件和NormFinder软件分析结果一致,候选内参基因的稳定性由高到低的顺序为:真核生物核糖体大亚基(28S rRNA)、真核生物核糖体小亚基(18S rRNA)、U6、5S rRNA和tRNA。BestKeeper软件分析结果显示28S rRNA和U6的稳定性优于其它候选内参基因,tRNA的表达不稳定,18S rRNA最适合与其它候选内参基因联合使用。结论 28S rRNA是最稳定的内参基因,28S rRNA和18S rRNA可联合使用作为尿液样本中qPCR的内参基因;这为尿液中游离miRNAs在疾病诊断中的定量分析提供了重要依据。