不同方法诱导小鼠胚胎成纤维细胞直接转化为神经干细胞效率的比较

摘要

目的比较不同方法诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs)直接转化为诱导型神经干细胞(induced neural stem cells, iNSCs)的效率,以进一步优化诱导方法。方法构建慢病毒表达载体pLenti6.3-Sox2-IRES2-EGFP,分别采用单转录因子Sox2、小分子物质、转录因子Sox2联合小分子物质共同作用三种方法将MEFs直接转化为iNSCs。qPCR检测神经干细胞的标志基因和多潜能标志基因的表达。免疫荧光检测神经干细胞的标记物nestin,计算iNSCs的转染效率。iNSCs在分化培养基中贴壁培养7~14 d,免疫荧光分别检测神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的细胞标记物MAP2、GFAP和Olig2的表达。结果诱导后4~6 d,MEFs的形态发生明显改变。免疫荧光显微镜下的结果显示诱导因子Sox2加小分子的诱导方法较单独使用Sox2和单独使用小分子物质进行诱导的效率高,差异具有统计学意义( P 0.05);共聚焦显微镜的结果证明3种方法诱导的iNSCs具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,3组间差异无统计学意义( P >0.05)。结论转录因子Sox2联合小分子共同作用可显著提高MEFs转化为iNSCs的效率且并不改变iNSCs的细胞功能特点。3组的iNSCs均具有神经干细胞自我增殖和多向分化的能力。