利用同源重组构建人脑的酵母双杂交cDNA文库

摘要

目的 利用SMART（switching mechanism at 5′end of RNA transcript）技术，通过同源重组的方法，在酵母菌株Y187中构建人脑全长cDNA文库。方法 利用SMART技术，以人脑总RNA为模板，反转录合成cDNA第一链。再在DNA聚合酶下，通过长距离PCR，扩增双链cDNA。同时构建pGADT7-Rec质粒载体。纯化的ds cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态Y187，经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD／-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人脑cDNA文库。结果 所获得的文库容量为1．2×10^6，重组子不同插入片断大小在0．3～2kb之间。结论 在酵母菌株Y187成功构建了用于酵母双杂交的人脑cDNA文库。