含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5真核表达载体的构建及初步功能研究

摘要

目的构建含小鼠FNDC5基因的绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-C3-FNDC5,并初步探索其对C2C12肌细胞的线粒体能量代谢的影响。方法应用反转录-聚合酶链反应法从小鼠腓肠肌和心脏组织中扩增出两端带有HindⅢ和EcoRⅠ酶切位点的FNDC5编码片段,经回收、纯化酶切后,依次连接到质粒PM D19-T和p EGFP-C3上,获得过表达载体后转染至C2C12肌细胞,48 h后以激光共聚焦显微镜拍摄线粒体荧光强度,以荧光定量PCR检测与线粒体能量代谢相关的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表达情况。结果 PCR及测序结果表明:重组质粒p EGFP-C3含有FNDC5段,方向及大小正确,过表达FNDC5可以增强线粒体荧光强度,并增加线粒体能量代谢相关的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表达。结论成功构建了小鼠真核表达载体p EGFP-C3-FNDC5,过表达FNDC5可以增强线粒体能量代谢。