自噬在结核菌素诱导破骨细胞形成中的作用及机制

摘要

目的研究自噬在结核菌素纯化蛋白洐生物(PPD)诱导破骨细胞形成中的作用及机制。方法培养小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞),用不同浓度(1.0、2.5、5.0、10.0 IU/mL)PPD及自噬激动剂雷帕霉素、自噬抑制剂3-甲基腺苷(3-MA)处理。处理24 h后,检测细胞活力;处理7 d后,检测破骨细胞数量、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活力、自噬小体数目及自噬标志基因Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平。结果与对照组相比,10.0 IU/mL PPD组细胞活力降低,差异有统计学意义(P<0.05),1.0、2.5、5.0 IU/mL PPD组细胞活力无明显变化。与对照组相比,2.5、5.0、10.0 IU/mL PPD组破骨细胞数量、TRAP活力、自噬小体数目及Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ的表达水平均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与5.0 IU/mL PPD组相比,5.0 IU/mL PPD+激动剂组破骨细胞数量、TRAP活力、自噬小体数目及Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ的表达水平均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);细胞活力无明显变化。与5.0 IU/mL PPD组相比,5.0 IU/mL PPD+抑制剂组破骨细胞数量、TRAP活力、自噬小体数目及Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ的表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);细胞活力无明显变化。结论PPD能够诱导破骨细胞形成,其机制与自噬激活有关。