农杆菌介导的栓皮栎体胚遗传转化初步研究

摘要

为了建立栓皮栎体胚遗传转化体系,以未成熟合子胚诱导的体胚为转化受体,采用带有pCAMBIA1301质粒的根癌农杆菌菌株EHA105,其中含有hptⅡ和GUS基因,研究不同因子对遗传转化的影响。结果表明:选择培养中适宜的抗生素浓度为300 mg/L头孢霉素和30 mg/L潮霉素。预培养时间为15 d时,转化率达91.7%;菌液浓度为OD600=0.5,乙酰丁香酮浓度为200μmol/L时,转化率可达100%。在添加潮霉素的选择培养基中培养4周后,组织化学染色和PCR检测证实,GUS报告基因已经转入到体胚中并正常表达。