肿瘤坏死因子-α预刺激培养成熟树突状细胞

摘要

目的利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导树突状细胞(DC)成熟的作用原理培养成熟DC的新方法.方法Fico11密度梯度离心分离健康人外周血获得单个核细胞,用含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养.TNF-α预刺激4h后加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及IL-4,48、96 h再次同时加入上述3种细胞因子并继续培养,第8～10天收集细胞,记作T-DC.FCM检测FDC表型,用3H-TdR检测同、异基因混合淋巴细胞反应(MLR)及抗原提呈功能;MTT法检测FDC诱导T细胞的杀伤活性.结果T-DC表达CD83、CDla、CD54、CD11a、CD80、CD86、HLA-DR、CD83HLA-DR并能刺激T细胞增殖与MLR(同基因、异基因)反应;T-DC具有抗原提呈功能、可诱导特异性杀伤.结论用TNF-α预刺激4 h的方法并在含有GM-CSF、IL-4的完全培养基中培养人外周血单核细胞8 d可获得成熟的DC.