五步蛇毒蛋白C激活剂的纯化与活性分析

摘要

目的 研究五步蛇毒蛋白C激活剂(PCA)组分的分离纯化及其抗凝活性.方法 借助DEAE-Cellulose、CM-Sephadex C-50和Sephadex C-75柱层析,以离子交换和凝胶过滤法从皖南产五步蛇粗毒中分离纯化PCA组分;以SDS-PAGE凝胶电泳检测其纯度和分子量,发色底物法(Chromogenic Substrate Assay)测定PCA组分的生色反应能力;测定PCA对正常血浆KPTT和PT的影响.结果 从五步蛇粗毒中纯化的PCA组分经SDS-PAGE测定为单一区带,相对分子质量约为18.5 kD,等电点pH 4.9;发色底物法显示其具有生色反应能力;该PCA 1 mg/L在体外明显延长KPTT,但PT不受影响.结论 采用离子交换和凝胶过滤法,可从皖南产五步蛇毒中分离纯化出高纯度的PCA组分,该组分可抑制内凝途径影响血液凝固过程.