三种PCR引物法制备生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因cDNA探针检测效果的比较

摘要

采用正义、反义引物及正义和反义引物双链PCR法制备了生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因的cDNA探针。检测结果表明,三种PCR引物法标记的cDNA探针显色灵敏度均可达到10pg/μL,对目标基因DNA的检测灵敏度可达90pg/μL,但反义引物PCR法标记探针的检测效果要好于正义和反义引物双链PCR法制备的探针;在目标基因DNA浓度一定的情况下,探针的浓度对检测效果的影响并不大;正义、反义引物PCR法制备的探针可不经煮沸变性处理直接使用;用50ng/mL浓度的反义引物PCR法制备的生物素标记cDNA探针可检测到带毒啤酒花叶片和花瓣中的啤酒花潜隐病毒RNA。