ST6-40转基因棉花株系的获得与耐盐性鉴定

摘要

棉花是世界上重要的经济作物之一,然而棉花的产量和品质经常受到盐害胁迫的影响,利用基因工程技术研发耐盐棉花品种,是解决这个问题的有效方法。ST6-40基因是通过一种功能基因挖掘方法从小盐芥中分离得到,该方法基于构建大量独立株系组成的转基因种子文库,通过高通量遗传筛选法筛选耐盐株系,得到的基因与耐盐功能直接相关。将携带有ST6-40基因的pCB2004-ST6-40重组载体通过农杆菌介导法转入陆地棉品种R15,获得转基因棉花再生株系;采用棉花生理指标测定法和直接耐盐鉴定方法对获得的转基因棉花株系进行耐盐性鉴定,转基因棉花株系T1和T2通过测定叶片游离脯氨酸含量进行鉴定,转基因棉花株系T3采用盐水浇灌直接鉴定,依据盐害级数计算盐害指数进行耐盐性判定。结果表明,共进行了350个转化事件,转化率为19%,获得65个阳性T0株系,其中再生植株中90%为阳性苗;经T_(1)、T_(2)、T_(3)连续3代基因组水平PCR检测及RNA水平上表达量鉴定,表明目的基因能够稳定遗传。转基因阳性植株经T_(1)、T_(2)、T_(3)耐盐性检测,获得6个耐盐性较受体对照R15显著增强的转基因纯合株系,4个转基因株系耐盐性优于耐盐对照品种中99807,表明转入ST6-40基因能有效提高棉花品种的耐盐性。