肺动脉平滑肌细胞自噬与合成分泌功能的关系

摘要

目的 分离培养慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠原代肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),以自噬增强剂及自噬抑制剂为工具药,测定PASMCs自噬相关基因的表达量及其合成分泌功能(IL-6、血小板源性生长因子:PDGF-AB分泌量)的变化,分析PASMCs自噬与其合成分泌功能的关系.方法 (1)建立COPD大鼠模型,分离、培养原代COPD大鼠PASMCs,将第4、5代PASMCs用于后续研究;(2)实验分组:①对照组:不加入任何干预剂;②LPS组;③3-MA+LPS组;④Rapamycin+LPS组;⑤3-MA单独处理组;⑥Rapamycin单独处理组,48 h后,以上每组做4个复孔,重复实验2次.各组分别于培养48 h后,收集细胞或细胞培养上清液测定以下指标:①Western Blot检测PASMCs自噬标记蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达量;②酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测各组培养上清液中IL-6及PDGF的含量变化.相关分析法分别分析自噬与合成分泌功能的相关性.结果 (1)LPS诱导下大鼠PASMCs中自噬相关基因LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及Beclin-1的表达量:LPS组、Rapamycin+LPS组及LPS+3-MA与正常对照组相比升高(P0.8,P<0.05).结论 以自噬调控剂为工具药,通过细胞实验,发现LPS诱导下PASMCs自噬与其合成分泌功能可能相关.