类风湿关节炎滑膜细胞中白三烯B4诱导肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β mRNA表达的测定

摘要

目的:探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞中白三烯B4(LTB4)诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达的定量测定方法。方法:RA患者的滑膜细胞进行原代培养,加入外源性LTB4或者在LIT存在的情况下,分别加入MK-886(5-脂氧合酶激动蛋白抑制剂)和苯丁抑制素(Bestatin,LTA4水解酶抑制剂),采用TaqMan PCR来定量检测滑膜细胞中TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达。结果:原代培养的RA滑膜细胞的基本TNF-α和IL-1βmRNA表达水平(TNF-α/GAPDH和IL-1β/GAPDH),分别为0.02±0.00和0.16±0.01。当加入外源性的LTB410-9和10-8mol/L后,LTB410-9mol/L使TNF-αRNA水平的表达增高了7倍,LTB410-8mol/L使TNF-αmRNA水平的表达增高了15倍,LTB410-8mol/L使IL-1βmRNA水平增高了1倍。而加入LIT刺激内源性的LTB4增高后,使TNF-α和IL-1βmRNA水平分别增高了145倍和12倍。在LIT存在的情况下,加入LTB4合成抑制剂MK-886(1μmol/L,10μmol/L)后,使TNF-αmRNA水平的表达分别下降15%和66%,IL-1βm RNA水平的表达分别下降了41%和71%。1100mg/L苯丁抑制剂使TNF-α和IL-1βmRNA水平表达分别降低了86%和79%。结论:RA滑膜细胞中LTB4可诱导TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达,并有助于定量测定mRNA表达水平。