猪胸膜肺炎放线杆菌细胞毒素ApxⅡ在谷氨酸棒杆菌中的截短表达

摘要

猪胸膜肺炎放线杆菌细胞毒素ApxⅡ(Actinobacillus.pleuropneumoniae toxin,Apx)作为亚单位疫苗可较好抵抗养猪业五大疾病之一的猪胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)。谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)是食品级安全微生物,疫苗蛋白表达潜力巨大。为实现重组ApxⅡ在谷氨酸棒杆菌中分泌表达,截取全长ApxⅡ中抗原表位序列获得ApxⅡ截短片段(ApxⅡ#5)并将其构建至谷氨酸棒杆菌表达载体pXMJ19中表达。为进一步提升ApxⅡ分泌表达水平,优化ApxⅡ表达盒中启动子和信号肽元件。结果表明,全长ApxⅡ未在谷氨酸棒杆菌中表达,截短ApxⅡ可在其中分泌表达。为进一步提高产量,通过启动子筛选,选用诱导型启动子tac,其表达强度为全合成启动子H36的1.58倍;通过信号肽筛选,选用CspB信号肽,其分泌表达强度为对照组CgR0949信号肽的5.48倍。在谷氨酸棒杆菌中表达截短ApxⅡ摇瓶水平产量达到51.1 mg·L^(-1),可与猪抗ApxⅡ阳性血清特异性免疫。研究结果可为兽用疫苗产业提供质量可靠、低成本表达体系。