利用接头插入技术构建环型T载体(pYCQ1)

摘要

人工设计接头序列,其特点为含有3'突出A末端,同时人工接头序列内部含有Xcm Ⅰ、Bsp M901、AceⅡ酶切位点.利用人工接头3'突出A与线性的pMD18-T载体的3'突出T连接,将线性的pMD18-T载体改造成环形具有自身复制功能的pYCQ1载体,降低了实验室使用T载体的成本,同时增加了载体的克隆位点.利用pYCQ1作为T载体时,用Xcm I酶切(Xcm I限制性片段具有3'T末端)pYCQ1载体可以得到线性的3'T粘性末端的pYCQ1-T载体.实验验证,pYCQ1-T载体可以在受体菌E.coli DH5α中进行大量自我复制,并能够克隆1 800 bp的外源PCR产物.