痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因的快速检测及利福平耐药机制研究

摘要

目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因,了解利福平耐药的分子机制。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物,用PCR方法从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增rpoB基因片段,对扩增获得的rpoB基因片段进行序列测定,比较分析耐多药、全耐、单耐利福平、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6 h内从耐药肺结核痰中快速检测到rpoB基因。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测有rpoB基因点突变,突变位点主要为531、516或526常见密码子,且绝大多数为单碱基突变,发现1例MDR-TB出现479位和531位密码子同时突变。敏感株和标准株无基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌rpoB基因及其突变,结核分枝杆菌对利福平的耐药性与rpoB基因点突变有关。