胚胎干细胞培养与鉴定的方法研究

摘要

目的 培养胚胎干细胞R1系及CGR8系并对其生物学特性进行检测.为探讨胚胎干细胞替代牙源性上皮细胞的研究奠定基础.方法 采用GIBCO公司生产的浓度为15％胎牛血清培养液,形成的ES细胞样集落,继续培养后观察集落的生长状态,并通过碱性磷酸酶染色,在体外形成拟胚体,移植入裸鼠皮下4周后取材,组织学观察进行鉴定.结果 ES细胞有其典型的形态学特征:集落呈鸟巢状,边缘清楚,表面平滑,结构致密,隆起生长,细胞之间界限不清楚;单个细胞体积小、核大;对ES细胞碱性磷酸酶进行检测,在AKP底物作用下,未分化的ES细胞显微镜下为棕褐色,分化的不着色.悬滴法培养ES细胞两天后生成拟胚体,它是胚胎干细胞在体外一定条件下自发形成的类似早期胚胎的球体结构,这种结构与胚胎发育过程中的卵圆柱期结构十分相似.体内研究表明,裸鼠皮下移植4周后,可形成含有三胚层组织的畸胎瘤,这种畸胎瘤细胞核型仍为二倍体,无恶性病变.结论 胚胎干细胞具有高度的复制能力及多向分化的潜能,为后续实验奠定了基础.