抗胰腺癌干细胞单克隆抗体的筛选和鉴定

摘要

目的:从抗胰腺癌干细胞单抗库中筛选、鉴定识别胰腺癌干细胞的功能性单抗,为胰腺癌干细胞靶向治疗提供候选抗体药物.方法:无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌HPAC细胞系中肿瘤干细胞的存在.流式细胞术检测HPAC的干细胞标志物CD133在球体细胞中的阳性比例,检测20株杂交瘤单抗在HPAC亲本和球体细胞中的阳性表达.双色荧光标记流式细胞术检测CD133和单抗在HPAC亲本和球体细胞中的共表达比例;无血清悬浮培养法观察单抗15E9对HPAC成球细胞自我更新的影响.CCK-8法检测单抗15E9对HPAC细胞增殖和耐药的影响.结果:HPAC细胞能在无血清培养基中存活、增殖并形成细胞球,成球率为4.8％±0.6％.HPAC球体细胞中CD133+细胞的比例较亲本细胞提高至11.6倍.20株候选杂交瘤单抗中有3株单抗能识别HPAC球体细胞中CD133+细胞,其中单抗15E9共染比例为3.5％,并能显著抑制HPAC细胞的成球,抑制率达到30.4％.单抗15E9联合吉西他滨能显著抑制HPAC球体细胞的增殖,联合组和对照组IC50分别为30.8 nmol/L和58.1 nmol/L.结论:本研究成功筛选出1株杂交瘤单抗可以识别胰腺癌干细胞,并且可识别CD133+的胰腺癌干细胞;体外功能显示该抗体具有抑制HPAC干细胞的自我更新能力,抗体干预后显著降低HPAC耐药能力,可能是潜在的胰腺癌干细胞的靶向治疗抗体药物.