DOCK1通过AMPK/mTOR通路对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的调控机制研究

摘要

目的探讨胞质分裂作用因子1(dedicator of cytokinesis 1,DOCK1)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响及相关机制。方法选取MM患者骨髓组织及人MM细胞株U266和RPMI 8266进行研究,采用实时荧光定量PCR(real time-quantitative PCR,RT-qPCR)法检测MM骨髓组织及细胞中DOCK1相对表达;构建敲低DOCK1表达细胞系,采用CCK-8法和流式细胞术检测DOCK1对MM细胞增殖与凋亡的影响;Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白(c-Myc,cyclin D1)、凋亡相关蛋白(Bax,Bcl-2)、自噬相关蛋白(LC3-II/LC3-I,P62)及AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果LV-DOCK1-shRNA2组的U266和RPMI 8266细胞增殖率在24,48和72h均显著低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(F_(U266)=21.130~100.108,F_(RPMI8266)=35.067~95.677,均P<0.001)。LV-DOCK1-shRNA2组的U266和RPMI 8266细胞增殖相关蛋白c-Myc,cyclin D1表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组(F_(U266)=56.061,71.584;F_(RPMI8266)=93.248,62.146,均P<0.001)。LV-DOCK1-shRNA2组的U266,RPMI 8266细胞24h,48h凋亡率显著高于阴性对照组和空白对照组(F_(U266)=77.051,61.533;F_(RPMI8266)=60.868,68.306,均P<0.001)。与空白对照组和阴性对照组比较,LV-DOCK1-shRNA2组U266和RPMI 8266细胞凋亡相关蛋白Bax表达水平明显升高,Bcl-2表达水平明显降低(F_(U266)=92.588,21.940;F_(RPMI8266)=82.736,14.511,均P<0.05);自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I表达水平明显升高,P62表达水平明显降低(F_(U266)=147.1,26.342;F_(RPMI8266)=173.300,31.477,均P<0.05)。LV-DOCK1-shRNA2组U266,RPMI 8266细胞AMPK/mTOR通路相关蛋白p-AMPK表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(F_(U266)=40.542,F_(RPMI8266)=40.892,均P<0.05);p-mTOR表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(F_(U266)=38.707,F_(RPMI8266)=43.002,均P<0.05)。在LV-DOCK1-shRNA2组再次转染DOCK1过表达质粒使其表达恢复后,p-AMPK和p-mTOR表达水平也被逆转得到恢复。结论DOCK1在多发性骨髓瘤细胞中具有促癌作用,其机制可能与通过抑制AMPK/mTOR通路,抑制多发性骨髓瘤细胞的凋亡和自噬有关。