采用正交设计优化HPV16L1重组蛋白表达的实验研究

摘要

通过正交试验对构建的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白的重组表达菌株pQE31-HPV16L1/M15 (pREP4)进行表达条件的优化,以增加目的蛋白的表达量.实验选取影响蛋白表达的 4 个主要因素,分别为诱导时间、诱导剂浓度、细菌密度和诱导温度,采用四因素两水平正交试验,通过SDS-PAGE及 Western blot测定重组表达蛋白,以Tanon凝胶成像系统分析目的蛋白含量作为检测条件优化效果的指标,所得数据采用SAS软件进行统计分析.实验结果表明在 37 ℃、IPTG 0.5 mmol/L, 菌密度OD600为 1.0 的条件下诱导4 h所得蛋白量最大;经统计正交分析的最佳诱导条件为 37 ℃、0.5 mmol/L IPTG和菌密度OD600为 1.0 的条件下诱导 7 h.经实验验证,应用正交分析的最佳条件诱导所得目的蛋白量最大,但实际中通常采用诱导 4 h条件.实验证明正交试验可以用于基因工程菌株蛋白表达条件优化过程,提高工作效率.