高效除藻真菌云芝F21a遗传转化体系的建立

摘要

以蓝藻高效降解菌云芝F21a(Trametes versicolor)为出发菌株,对其原生质体的制备、再生条件及限制性内切酶介导的遗传转化进行研究.结果表明:在PDA培养基上,28℃培养4d的菌丝最适于原生质体制备;0.6 mol/L KC1为最适等渗条件;30℃混合酶液(2％ cellulase +2％ snailase +2％ lywallzyme)酶解4h,原生质体产量达到2.375×107个/mL,此时再生率达0.74％.采用限制性内切酶介导技术可将质粒pAN7-1导入云芝F21a的原生质体,在含有150 μg/mL潮霉素的RM培养基中能够获得再生菌株,PCR验证初步表明该质粒已经转入云芝F21a原生质体.连续传代转接显示,阳性转基因菌株外源基因可以稳定表达,本结果为研究真菌高效消除蓝藻的分子机制奠定基础.