通过定点突变提高纳豆激酶纤溶活性和热稳定性

摘要

纳豆激酶(Nattokinase, NK)是一种纤溶酶,可溶解血栓,常用于治疗心血管疾病(CVDs)。然而,野生型NK往往表现出很少的纤溶能力和较低的热稳定性,针对如何提高NK的热稳定性和活性开展研究。使用重叠延伸PCR法将NK中位于194位的Ser替换为Pro,为验证突变后的热稳定性,将野生型NK和突变体S194P均在不同温度下孵育相同时间,使用纤维蛋白板法测定二者酶活,验证热稳定性。成功构建了pET-26b-NK_(s194p),测量酶活结果显示,野生型NK和突变体S194P酶活分别达到101.30 IU/mL和123.23 IU/mL,结果表明突变体S194P的酶活比野生型NK高(18.10±2)%,将野生型NK和突变体S194P在60~65℃温度下孵育30 min后测量酶活,野生型NK在63℃时丧失酶活,突变体S194P在65℃时丧失酶活,耐热温度提高2℃。结果表明,突变体S194p的蛋白结构在突变后发生了改变,使NK提高了耐热温度。