外周血中乳腺癌细胞hMAM表达检测方法的建立及初步应用

摘要

目的 建立反转录结合荧光定量PCR(FQ-PCR)检测外周血乳腺癌细胞hMAM基因表达方法,了解其监测乳腺癌细胞微转移的应用价值.方法 克隆目的片段,制备标准品并做测序验证.培养乳腺癌MDA-MB453、MCF7细胞株,制成血液标本模型,GAPDH基因为内对照,反转录结合FQ-PCR检测乳腺癌细胞株血标本模型和10例乳腺癌患者外周血的hMAM表达.结果 电泳和测序证实,克隆产物系预期的目的片段.FQ-PCR标准曲线的相关系数为-1.0;用103拷贝/微升标准品重复检测5次,(-x)±s:718.9±120.5,CV值:16.7%;MDA-MB453细胞的血标本做灵敏度试验,相当于104个血细胞中含1个乳腺癌细胞可检出阳性.未检测到MCF7细胞的hMAM表达.10例乳腺癌患者,淋巴结转移的5例中,3例hMAM表达阳性、2例阴性;无淋巴结转移的5例中,1例hMAM表达阳性、4例阴性.结论 本方法可有效监测外周血中微转移的乳腺癌细胞,发现不同乳腺癌细胞系hMAM表达程度差异大.