大鼠免疫球蛋白样转录物3过表达腺病毒载体的构建及鉴定

摘要

目的 构建免疫球蛋白样转录物3(immunoglobulin-like transcript 3,ILT3)过表达腺病毒载体,以期进一步研究ILT3基因功能及其在心血管疾病中的作用.方法 针对大鼠ILT3设计引物,通过PCR扩增获取目的基因,以琼脂糖凝胶电泳鉴定,行胶回收与PCR产物纯化.使用限制性内切酶BamH Ⅰ与Age Ⅰ对载体质粒以及纯化后的PCR产物进行双酶切,将酶切后的PCR产物与载体连接,连接产物加入至感受态细胞培养后挑取菌落进行PCR鉴定、测序、比对及质粒抽提.将ILT3重组质粒与腺病毒辅助包装质粒共转染至HEK293细胞,获取病毒粗提液并进行扩增、纯化,终点稀释法进行病毒效价检测,在荧光显微镜下观察腺病毒转染效率.结果 PCR与测序鉴定表明GV314-ILT3重组质粒构建成功.终点稀释法测得病毒效价为1×109PFU/ml,荧光显微镜下观察显示病毒转染效率较高.结论 携带ILT3基因的腺病毒载体构建成功,获取的腺病毒具有较高的效价与转染效率.