拉米夫定治疗期间患者体内HBV-DNA聚合酶基因变异的分析

摘要

目的 :了解接受拉米夫定 (Lamivudine)治疗的慢性乙型肝炎患者体内HBV P基因的变异特点及规律 ,提高抗HBV的治疗效果。　方法 :①选择 5 0例服用拉米夫定 (1 0 0mg /d)的慢性乙型肝炎患者 ,采集 1 3例服药 4 8周时HBV DNA检测阳性患者的外周血 ,提取HBV DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增后直接测序 ,分析HBV P基因的酪氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸 (YMDD)基序变异情况 ,同时用基因芯片方法进行验证。②用逆向追踪方法对上述 1 3例HBV DNA阳性患者服药前和服药 36周时血清标本中扩增的HBV P基因片段进行测序及HBV DNA定量的检测。同时对 5 0例患者服药前、服药 1 2、2 4、36和 4 8周时的丙氨酸氨基转移酶 (ALT)进行检测 ,观察对比发生YMDD变异者及非变异者ALT的变化情况。　结果 :①拉米夫定治疗 4 8周结束时 ,1 3例HBV DNA检测阳性的患者中有 5例外周血中HBV P基因发生YMDD变异 ,其中 2例为YVDD变异 ,伴L5 2 8M变异 ;3例为YIDD变异。②所有YMDD变异均发生于用药 36周以后 ,变异率为 1 0 % ,基因芯片检测结果与测序完全符合。③除了YMDD外 ,还发现了若干其他的变异位点 ,如 1例伴有N4 82E、N4 87K、V5 2 1L、T5 32S和S5 6 1T突变 ;1例伴有T4 6 6N、N4 6 9I、Y4 72N、G4 75R、D4 79N和D4 82N突变 ;