野生型和突变型ABCB6红色荧光融合蛋白表达载体的构建

摘要

目的 ABCB6基因突变与多种疾病相关,尤其是遗传性泛发型色素异常症。为进一步研究ABCB6在色素代谢中的作用,构建野生型和突变型ABCB6红色荧光蛋白融合蛋白表达载体p DsRed-wt-ABCB6和p DsRed-L356P-ABCB6,并观察ABCB6在人黑素细胞瘤细胞系A375中细胞定位情况。方法以前期构建的p IRES2-Zs Green1-ABCB6表达载体为基础构建野生型和突变型ABCB6蛋白与红色荧光蛋白融合表达载体p DsRed-wt/L356P-ABCB6,将构建的质粒转染A375细胞,Western blot检测细胞中ABCB6的表达水平,激光共聚焦显微镜观察ABCB6在细胞中的定位。结果 p DsRed-wt/L356P-ABCB6质粒经菌落PCR、双酶切和测序鉴定正确,转染A375细胞后,Western blot检测细胞中ABCB6表达量显著增高,激光共聚焦显微镜观察到野生型和突变型ABCB6均定位于细胞质中。结论 p DsRed-wt/L356P-ABCB6融合蛋白表达载体成功构建,观察了ABCB6在细胞中的定位,为进一步研究ABCB6的功能及其在相关疾病中致病机制奠定了良好的基础。