九味羌活丸和香砂养胃丸制剂米粉掺伪检测方法的建立和质量标准的制定

摘要

目的:建立荧光探针PCR检测方法并拟定质量标准,旨在实现快速、准确地检出九味羌活丸(水丸)和香砂养胃丸(水丸)中的掺伪米粉。方法:通过优化样品提取方法,有效提取九味羌活丸和香砂养胃丸复方的基因组;通过文献检索和生物信息学分析,筛选得到适用于本试验的米粉特异性引物和TaqMan探针,并优化PCR检测方法。实验对方法的特异性、检出限、精密度和重复性进行考察,对市售样品进行筛查,并拟定了中成药荧光探针PCR检测方法的检测标准。结果:本实验优化了样品的前处理方法,通过文献检索和生物信息学分析检索到3组特异性引物和探针,并筛选得到了适合本研究的引物和探针。荧光探针PCR方法的检出限为每克样品可检出0.001 g米粉。九味羌活丸精密度的C_(t)值为30.34,相对标准偏差(RSD)为1.23%;重复性的C_(t)值为29.88,RSD为1.98%。香砂养胃丸精密度的C_(t)值为35.43,RSD为2.63%;重复性的C_(t)值为35.09,RSD为2.11%。对市售的7个厂家13批次样品进行分析,检出来自A厂家的5批次九味羌活丸和2批次香砂养胃丸掺入了米粉。利用克隆测序的方法,对PCR产物进行再确认,经NCBI数据库比对,结果均为水稻(Oryza sativa L.)。本研究拟定了九味羌活丸(水丸)和香砂养胃丸(水丸)荧光探针PCR检测方法标准。结论:建立了米粉的荧光探针PCR检测方法,并拟定质量标准,可快速准确地鉴别出米粉掺伪的九味羌活丸和香砂养胃丸样品,为中成药荧光探针PCR方法的标准制订提供参考。