氧化苦参碱对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其机制

摘要

目的:探讨氧化苦参碱(OMT)对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制.方法:SiHa细胞分为对照组、低剂量OMT组、中剂量OMT组和高剂量OMT组,分别以含二甲基亚砜(DMSO)及含0.4、0.8和1.6 g·L-1 OMT的RPMI 1640培养基培养.培养24 h后,Hoechst33258染色法观察细胞形态表现;分别培养24、48和72 h后,MTT法检测各组细胞增殖活性;培养48 h后,流式细胞术检测各组不同细胞周期细胞百分率和凋亡率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法分别检测各组细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA和蛋白表达水平.结果:荧光显微镜下观察,对照组细胞生长良好,蓝色荧光较弱;低剂量OMT组细胞可见少量凋亡小体;中剂量OMT组细胞数量减少,凋亡小体数量增多;高剂量OMT组蓝色荧光增多,细胞解体,核皱缩,凋亡小体数量明显增加.与对照组比较,培养24、48和72 h后,低、中和高剂量OMT组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),G0/G1期细胞百分率明显升高(P<0.05),S期和G2/M期细胞百分率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中β-catenin、cyclinD1及Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05).结论:OMT可将SiHa细胞阻滞在G1期,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.