视网膜色素上皮单细胞层的培养

摘要

目的:利用微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统培养视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞,为视网膜色素上皮细胞转运等功能的研究提供体外模型.方法:将ARPE-19细胞接种到底部为层黏蛋白包被的微孔滤膜的小室(内室)中,并将此小室放到6孔培养板(外室)内进行培养.用吉姆萨染色观察细胞生长情况,并用含有台酚蓝的培养液检测细胞间的紧密连接.结果:将1.0×105·mL-1的ARPE-19细胞混悬液1.5 mL接种于内室的层黏连蛋白包被的微孔滤膜上进行培养,大约第5天细胞长满滤膜,经吉姆萨染色,在光学显微镜下确认视网膜色素上皮细胞充分融合,在层黏连蛋白表面形成一整齐的单细胞层,且台酚蓝不能通过该单细胞层.结论:培养在层黏连蛋白包被的微孔滤膜上的视网膜色素上皮细胞,如同体内的视网膜色素上皮细胞一样形成单细胞层,细胞间形成功能性的紧密连接,可作为视网膜色素上皮细胞转运等功能研究的体外模型.