重组PCA13-hBMP2质粒构建Ad5-hBMP2腺病毒载体

摘要

目的:通过重组PCA13-hBMP2质粒构建Ad5-hBMP2腺病毒载体,并将其扩增纯化.方法:通过PCR技术获得hBMP2基因,酶切PCA13-MCMV质粒,连接PCA13-MCMV/EcoR Ⅰ+HindⅢ与hBMP2,获得PCA13-hBMP2质粒.将质粒PCA13-hBMP2与含有5型腺病毒右臂的质粒pBHGE3通过脂质体共转染至293细胞,提取腺病毒DNA,应用PCR、双酶切进行鉴定,扩增Ad5-hBMP2腺病毒载体,测定病毒滴度.Adv-hBMP2转染大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),测定不同时间hBMP2蛋白表达量.结果:成功构建PCA13-hBMP2质粒,通过同源重组成功获得Ad5-hBMP2腺病毒载体,扩增后测得病毒滴度为1.669×1010 pfu·mL-1.Adv-hBMP2转染大鼠BMSCs后hBMP2蛋白表达量随时间延长明显增加(P＜0.01).结论:获得可表达hBMP-2的Ad5-hBMP2腺病毒载体,为基因辅助的骨组织工程技术提供安全有效的转基因载体.