PTTG靶向siRNA表达载体构建及其沉默效率评价

摘要

目的:构建针对人脑胶质瘤细胞系U251的高效率沉默垂体瘤转化基因(PTTG)的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体.方法:合成特异性干扰PTTG的siRNA片段,并与pGenesi12载体连接,构建PTTG干扰载体(pGenesi12-PTTG siRNA).利用脂质体将其转染U251细胞,分为正常细胞对照组、HK阴性对照组和3个siRNA干扰组(pGenesi12-PTTG siRNA1、pGenesi12-PTTG siRNA2和pGenesi12-PTTG siRNA3),应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和流式细胞术对转染后U251细胞中PTTG的mRNA和蛋白表达水平进行分析.结果:酶切证实PTTG-siRNA表达载体构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致;转染pGenesi12-PTTG siRNA后,3个干扰组的U251细胞中PTTG基因和蛋白表达水平均较正常对照组显著降低(P<0.01).结论:成功构建了能高效率沉默PTTG的RNAi表达载体;pGenesi12-PTTG siRNA高效地抑制了胶质瘤U251细胞中PTTG基因的表达.