CCNL1真核表达载体的构建及其在MDA-MB-231细胞中表达的鉴定

摘要

目的:构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAX Ⅰ -CCNL1和pEGFP-C1-CCNL1三组重组载体,鉴定其在MDA-MB-231细胞中的表达情况.方法:用PCR方法扩增得到CCNL-1基因,然后用EcoR Ⅰ、HindⅢ酶切CCNL1基因,将其分别与pcDNA3.1(+)、pVAX Ⅰ和pEGFP-C1载体连接,构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAX Ⅰ -CCNL1和pEGFP-C1-CCNL1三组重组载体,然后用Fugene HD转染试剂将构建的真核表达质粒转染入MDA-MB-231细胞,48 h后,用荧光定量PCR和Western blotting方法检测CCNL1在MDA-MB-231细胞中的差异表达.结果:转染MDA-MB-231细胞48 h后,在荧光显微镜下,pEGFP-C1-CCNL1重组载体能观测到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAX Ⅰ-CCNL1重组载体未观测到；在MDA-MB-231细胞中CCNL1的mRNA和蛋白质表达水平由高到低依次为pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAX Ⅰ -CCNL1和pEGFp-C1-CCNL1.结论:成功构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1和pEGFP-C1-CCN1三组重组载体,且pcDNA3.1( +)-CCNL1在MDA-MB-231细胞中高表达.