LPA1介导溶血磷脂酸对卵巢癌细胞系基质金属蛋白酶2和9释放与活化的调控作用

摘要

目的:将溶血磷脂酸(LPA)受体LPA1基因的质粒载体导入卵巢癌细胞系SKOV3和3AO,建立高表达LPA1的卵巢癌细胞株,观察转染细胞株的生物学特性,探讨LPA对稳定表达LPA1的人卵巢癌细胞株基质金属蛋白酶2和9(MMP-2和MMP-9)表达及活性的影响.方法:用脂质体介导法将pcDNA3.1flag-LPA1转入人卵巢癌细胞系(SKOV3和3AO),同时设细胞对照组及空载体组.利用RT-PCR鉴定转染细胞株表达水平,并通过检测细胞株生长、增殖变化观察转染细胞株的生物学特性.明胶酶谱检测LPA对稳定表达LPA1的卵巢癌细胞株.MMP-2和MMP-9表达及活性的影响.结果:LPA1基因的质粒载体成功导入卵巢癌细胞系SKOV3和3AO,建立高表达LPA1的卵巢癌细胞株,转染前后细胞生物学特性无明显变化.利用RT-PCR半定量检测转染细胞LPA1mRNA表达水平,经转染后的SKOV3-LPA1和3AO-LPA1细胞LPA1mRNA表达水平明显高于对照组SKOV3、3AO细胞及空载体组SKOV3-Vector、3AO-Vector细胞LPA1 mRNA的表达水平,差异有统计学意义(P＜0.05),对照组3AO、SKOV3细胞与空载体组SKOV3-Vector、3AO-Vector细胞的表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.5).明胶酶谱法检测结果表明,实验组SKOV3-LPA1和3AO-LPA1细胞MMP-9、MMP-2释放和活化量与对照组SKOV3、3AO和空载体组SKOV3-Vector比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:经鉴定获得了生物学特性稳定的LPA1高表达的卵巢癌细胞株.在LPA诱导的MMPs的活化过程中,LPA1可能作为-个负性调节因子.