甜菜碱醛脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达、纯化及功能性鉴定

摘要

为转BADH基因玉米品系Western杂交等蛋白水平检测做前期准备,对辽宁碱蓬中的甜菜碱脱氢酶基因(BADH)进行原核表达、纯化及功能性鉴定.通过构建含有BADH基因的原核表达载体转化至大肠杆菌BL21中,诱导其进行原核表达,并对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析纯化分析.所构建pET28a-BADH原核表达载体经PCR和双酶切鉴定及测序分析与预期结果一致；SDS-PAGE结果显示表达产物约50.5 kD,且为可溶性；生物功能性鉴定BADH蛋白的表达使受体细胞在高盐条件下的抗性有显著提高.