蓖麻钙依赖蛋白激酶26基因克隆、表达与蛋白纯化

摘要

植物蛋白激酶对蓖麻生长发育具有重要的作用,研究蓖麻蛋白激酶类钙依赖蛋白激酶26基因在大肠杆菌中的克隆、重组表达以及蛋白纯化,为进一步探索蓖麻钙依赖蛋白激酶26蛋白的功能与作用机制。通过PCR方法克隆获得蓖麻钙依赖蛋白激酶26基因表达序列,连接至原核表达载体pGEX-4T-1内后分别转化至BL21、T7、Rosetta大肠杆菌感受态中,通过不同浓度的异丙基硫代-β-D半乳糖苷(isopropyl-beta-Dthiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,分析蓖麻钙依赖蛋白激酶26蛋白的可溶性,并利用离心法纯化获得目的蛋白。结合原核表达和蛋白纯化结果发现,转化至BL21大肠杆菌感受态中的重组蛋白在用1 mmol/L IPTG诱导下的表达量最高,纯化后可获得纯度较高的目的蛋白。