水稻条纹叶枯病毒外壳蛋白基因在工程水稻植株中的表达

摘要

水稻条纹叶枯病是以灰飞虱(Laodelphax striatellus)为传播介体的间歇性水稻病毒流行病害,流行年份造成水稻生产严重损失。在对该病病原水稻条纹叶枯病毒(RSV)外壳蛋白进行了氨基酸组成、cDNA合成、克隆、产物表达和全序列分析基础上,将RSV外壳蛋白基因插入植物表达载体pROK Ⅱ,用基因枪法转化水稻悬浮细胞系。轰击前将分散性好的胚性细胞团均匀地铺在含有滤纸的平皿上。用CaCl_2和亚精胺将质粒DNA包裹于平均直径为1.09μm的钨粉上。将钨粉滴在子弹前部凹穴中,在-0.095 MPa真空度的条件下击发。在存在G418条件下,两个月后可从褐化培养物中筛选出一些抗性细胞团。将其转入分化培养基后分化出绿苗。用Southern杂交法测定了由抗性细胞团再生的10株水稻苗,其中有2株出现了分子量与CP基因对应的杂交带。Western测定的结果显示,在转化植株中有CP基因的表达。