实时RT-LAMP与实时荧光RT-PCR检测贝类中GⅡ型诺如病毒的研究

摘要

[目的]建立、评价GⅡ型诺如病毒的一步法实时RT-LAMP快速检测方法。[方法]选取GII型诺如病毒ORF1与ORF2接头处高度保守基因序列设计RT-LAMP引物,经条件优化,分析该方法的检测灵敏性和特异性,并与实时荧光RT-PCR进行比较。[结果]GⅡ型诺如病毒RT-LAMP的最佳反应条件是65℃,内外引物浓度比达1:10。该方法同其余常见食源性病毒没有交叉反应。对RNA参照品其检测低限可达10个RNA拷贝/反应,同实时荧光RT-PCR的检测水平相当;在人工感染的牡蛎和缢蛏中,RT-LAMP较实时荧光RT-PCR的检测灵敏度略低10倍。[结论]本研究所建立的RT-LAMP方法为GⅡ型诺如病毒提供了一种灵敏、快速且简便的检测方法。