中华倒刺鲃MYD88基因的克隆及表达载体构建

摘要

髓样分化因子88（Myeloid-Differentiation Primary Response Protein 88,MYD88）作为Toll样受体的关键接头蛋白，在先天性免疫中发挥重要作用。利用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）的技术克隆出了中华倒刺鲃（Spinibarbus Sinensis）MYD88基因的c DNA全长序列（GenBank编号：OQ079619），生物信息学分析表明：该序列全长1303 bp，其中开放阅读框855 bp，共编码284个氨基酸；MYD88蛋白具有死亡域和Toll/白介素1受体结构域；邻接法构建的系统进化树显示，中华倒刺鲃的MYD88和其他已报道的鱼类的MYD88聚为一支。先用PCR方法扩增MYD88基因的编码区片段，继而将其克隆到pcDNA3.1-MCS-3xflag载体中构建表达载体，随后对获得的表达载体做双酶切检测及测序检测，结果表明，表达载体构建成功。为进一步探讨MYD88基因在中华倒刺鲃先天性免疫中的作用提供了一定的依据。