不同来源抗冻蛋白在毕赤酵母中的异源表达

摘要

抗冻蛋白(AFPs)具有调控冰晶生长行为的特性,对冷冻食品有很好的改良效果,但天然抗冻蛋白在生物体内含量低,且提取、纯化困难,生产成本高,极大地限制了其发展.因此,探寻合适的制备方法增加产量、降低生产成本,对于抗冻蛋白的发展非常重要.基于美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中胡萝卜AFP、点带石斑鱼AFP和黄粉虫AFP的氨基酸序列,通过密码子优化合成3种重组AFPs(rAFPs)基因序列,并通过构建酵母表达载体、G418和24孔板多重筛选,获得3株分别产rCaAFP、rFiAFP和rTmAFP的重组毕赤酵母菌株.对这3株重组毕赤酵母菌株产rAFPs的发酵过程进行初步优化,并对3种rAFPs进行一系列纯化后得到电泳纯的、热滞活性较高的rAFPs.研究表明,利用毕赤酵母异源表达生产rAFPs,产量高、易纯化,所得目的蛋白抗冻活性好,是一种有效的增加抗冻蛋白产量的生产方式.