全反式维甲酸在脂多糖诱导的小鼠附睾上皮细胞炎性反应中的作用及机制研究

摘要

目的 探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,atRA)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的附睾上皮细胞炎性反应中的作用及分子机制.方法 以LPS诱导附睾上皮细胞建立炎症模型,给予不同浓度的atRA、atRA受体抑制剂处理,以及转染转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)的小干扰RNA,敲低细胞中内源性TGF-β1的表达,采用实时荧光定量PCR检测细胞中炎性因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和TGF-β1的mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot方法 检测附睾上皮细胞中TGF-β1的蛋白表达水平.结果 LPS组附睾上皮细胞中IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平明显高于对照组,给予不同浓度的atRA处理后小鼠附睾上皮细胞的炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平明显降低,呈浓度梯度依赖性(P<0.01).LPS组附睾上皮细胞培养基上清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显高于对照组,给予不同浓度的atRA处理后小鼠附睾上皮细胞培养基上清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显降低,呈浓度梯度依赖性(P<0.01).LPS组小鼠附睾上皮细胞中TGF-β1 mRNA的表达水平明显低于对照组,给予不同浓度atRA处理后小鼠附睾上皮细胞中TGF-β1 mRNA的表达水平明显升高,呈浓度梯度依赖性(P<0.01).Si-TGF-β1组TGF-β1 mRNA表达水平明显低于Si-Ctl组(P<0.01).atRA+Si-Ctl+LPS组小鼠附睾上皮细胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA相对表达量低于Control+LPS组,atRA+Si-TGF-β1+LPS组小鼠附睾上皮细胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA相对表达量明显高于atRA组(P<0.01).atRA+Si-Ctl+LPS组小鼠附睾上皮细胞培养液上清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量低于Control+LPS组,atRA+Si-TGF-β1+LPS组小鼠附睾上皮细胞培养液上清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显高于atRA组(P<0.01).atRA组小鼠附睾上皮细胞中维甲酸α受体(retinoic acid receptor alpha,RARα)和维甲酸β受体(retinoic acid receptor beta,RARβ)mRNA相对表达量明显高于Normal组(P<0.01).atRA组TGF-β1 mRNA相对表达量明显高于Control组,atRA+BMS 195614组TGF-β1 mRNA相对表达量明显低于atRA组(P<0.01).结论 atRA可以抑制LPS诱导小鼠附睾上皮细胞炎性反应,其分子机制可能是通过与RARα受体结合上调TGF-β1的表达而抑制其抗炎反应.