猪CD163cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立

摘要

猪CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重要受体之一.为探讨此受体在病毒感染过程中与PRRSV的相互作用,需要建立稳定表达猪全长CD163基因的细胞系.首先通过RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中扩增猪全长CD163 cDNA,然后通过KpnI和Xho I将其插入到pcDNA3.1A质粒中,构建成真核表达载体.将表达载体转染CHO-K1细胞,通过G418加压,筛选出在细胞膜上稳定表达猪CD163的细胞系.结果显示,扩增出的猪CD163基因与基因库的序列基本一致,个别碱基的突变没有引起编码氨基酸的改变.通过转染表达载体和G418筛选,成功构建了稳定表达猪全长CD163基因的CHO-K1细胞系.经流式细胞仪检测证实,重组猪CD163可在CHO-K1细胞膜上进行表达,这为进一步研究PRRSV与CD163受体相互作用提供了必要条件.