高表达hoxb4转基因斑马鱼胚胎定向造血阶段cdh5-mRNA的表达

摘要

目的:探讨高表达hoxb 4转基因系斑马鱼胚胎定向造血发育中cdh 5-mRNA的表达。方法:实验分为野生型(WT)对照组、增强绿色荧光蛋白(EGFP)对照组及高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎,收取定向造血阶段32、36、40、44、48 hpf的胚胎各30枚;将pCS^2+-cdh 5重组质粒进行单酶切,用T3 RNA体外转录体系转录得到地高辛标记的cdh 5基因的反义mRNA片段,以其为探针对各组胚胎进行全胚胎原位杂交,显微镜下观察32、36、40、44、48 hpf的造血组织区域cdh 5-mRNA杂交信号并拍照记录灰度值。结果:32、36 hpf时高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎造血组织AGM区、PBI区cdh 5-mRNA的表达较EGFP对照组及WT对照组增高,差异均有统计学意义(P0.05);40、44 hpf时高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎造血组织PBI区cdh 5-mRNA的表达较EGFP对照组及WT对照组增高,差异均有统计学意义(P0.05);48 hpf时3组斑马鱼胚胎在造血组织区域均未见cdh 5-mRNA杂交信号。结论:在高表达hoxb 4转基因斑马鱼胚胎中,cdh 5-mRNA在定向造血阶段相应造血区域高表达。