中华绒螯蟹金属硫蛋白基因在A549细胞中的表达及鉴定

摘要

目的:克隆中华绒螯蟹金属硫蛋白(metallothionein,MT)基因至真核表达载体,表达蛋白,为进一步研究中华绒螯蟹金属硫蛋白的结构和功能打下基础.方法:设计特异性引物,PCR扩增得到MT基因编码序列,定向克隆至带GFP标签的真核表达载体pEGFP-C1,双酶切及测序鉴定重组质粒后转染A549细胞,荧光观察及Western Blot检测目的蛋白表达情况.结果:通过双酶切和测序确认成功构建了中华绒螯蟹MT基因的真核表达载体;重组质粒转染A549细胞24 h后观察到了绿色荧光,细胞裂解物经过Western Blot检测到符合预期的MT-GFP融合蛋白特异性条带.结论:成功构建了中华绒螯蟹MT基因的真核表达载体,证实了该基因能在A549细胞中成功表达,为进一步研究MT的结构功能打下了基础.