HOXC10基因对体外人牙髓干细胞增殖和成脂分化的调控作用机制研究

摘要

目的:探讨HOXC10基因对体外人牙髓干细胞增殖和成脂分化的调控作用及其分子机制.方法:原代分离培养人牙髓干细胞,分别将si-HOXC10、si-con转染至人牙髓干细胞,分别记作si-HOXC10组、si-con组,未经转染的人牙髓干细胞记作NC组,同时将人牙髓干细胞进行成脂诱导.qPCR与Western blotting分别检测HOXC10 mRNA及蛋白表达量;采用Western blot-ting检测成脂诱导后细胞中过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)、重组人CCAAT增强子结合蛋白-α(C/EBP-α)蛋白水平.甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移能力;采用酶标仪检测细胞的黏附能力;Western blotting检测沉默HOXC10对PPAR、C/EBP-α、WNT通路相关蛋白糖原合成酶激酶-3(GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响.结果:与培养前相比,成脂分化诱导后人牙髓干细胞中HOXC10 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),PPARγ、C/EBP-α的表达水平显著降低(P＜0.05);与si-con组相比,si-HOXC10组人牙髓干细胞活性显著降低(P＜0.05);相较于si-con组,si-HOXC10组人牙髓干细胞迁移细胞数显著增多(P＜0.05),细胞黏附能力显著升高(P＜0.05);与si-con组相比,si-HOXC 10组人牙髓干细胞中PPARγ、C/EBP-α的表达水平显著降低(P＜0.05);与si-con组相比,si-HOXC10组人牙髓干细胞WNT通路中GSK3β蛋白水平显著降低(P＜0.05),β-catenin蛋白水平显著升高(P＜0.05).结论:沉默HOXC10基因可抑制人牙髓干细胞增殖及成脂分化,其作用机制可能是通过激活WNT通路而发挥作用.