香烟烟雾提取物抑制小鼠骨骼肌细胞再生的机制研究

摘要

目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)影响小鼠骨骼肌细胞生成的机制.方法:用2％马血清诱导C2C12成肌细胞分化成骨骼肌细胞复制体外骨骼肌再生模型,实验分为正常(N)组(不加任何干预培养6 d)和CSE组(加入终浓度为0.2％CSE,隔2 d换液并加CSE).通过细胞免疫荧光法检测骨骼肌细胞标志物MyHC蛋白表达,以鉴定C2C12成肌细胞是否分化形成骨骼肌细胞.Western blotting法检测MyHC和分化指标MyoD、Myogenin以及衰老因子P53、P21、P16蛋白表达,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测Ⅰ型肌纤维MyHC7 mRNA和Ⅱ型肌纤维MyHC4 mRNA表达.结果:免疫荧光显示C2C12成肌细胞分化6 d后其细胞质被染成红色,成功分化为骨骼肌细胞.与N组比较,CSE组MyHC蛋白及MyHC4mRNA、MyHC7mRNA水平下降,MyoD、Myogenin蛋白表达量降低,P53、P21、P16蛋白表达量升高.结论:CSE抑制小鼠骨骼肌细胞再生,其机制可能与肌细胞分化能力减弱、激活P53途径诱导细胞衰老有关.