lncl71靶向调控miR-149-5p促进肝癌细胞的迁移

摘要

目的:探讨长链非编码RNARP1-171K16.5(lnc171)对肝癌细胞的作用和机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测正常人和肝癌患者血浆外泌体、正常肝细胞和肝癌细胞中lnc171的表达水平;设计siRNA转染肝细胞,分为空白对照组(Blank组)、阴性对照组(siNC组)和干扰组(si171组);采用Transwell实验检测lnc171对细胞迁移的影响;RegRNA、miRDB和LncBase在线靶基因预测网站预测lnc171的靶基因,并采用Venny2.1对3个数据库预测结果取交集;双荧光素酶报告基因实验验证1nc171和miR-149-5p之间的靶向关系;生物信息学分析miR-149-5p的靶蛋白RAP1并用qPCR验证.结果:肝癌患者血浆外泌体中lnc171的表达水平高于正常对照者(P＜0.01),肝癌细胞中lnc171的表达水平高于正常肝细胞(P＜0.05);与siNC组比较,转染si171-3后,HL-7702和Hep3B细胞迁移数量明显下降(P＜0.05);生物信息学预测lnc171的靶基因为miR-149-5p;与siNC组比较,Hep3B细胞转染sil71-3后miR-149-5p 的表达量升高(P＜0.001);lnc171WT 中miR-149-5p mimics组荧光素酶活性较miR-NC组下降(P＜0.05);利用TargetScan和MicroT-CDS在线网站预测miR-149-5p的靶基因取得256个交集靶基因,将其放入DAVID数据库中进行KEGG通路富集得到与迁移相关的RAP1信号通路.生存分析发现,Ras-associated protein 1A(RAP1A)高表达的肝癌患者预后差.结论:lnc171在肝癌中高表达,可能通过靶向作用miR-149-5p调控RAP1A表达水平从而促进肝癌细胞迁移.