高丽槐素对鼻咽癌CNE1细胞增殖、迁移、凋亡的影响及机制

摘要

目的:探讨高丽槐素对鼻咽癌(NPC)细胞CNE1增殖、单克隆、迁移和凋亡的影响及潜在的作用靶点.方法:将培养的CNE1细胞随机分为空白对照组和高丽槐素给药组.采用CCK8法检测不同浓度的高丽槐素作用24 h、48 h、72 h后的增殖抑制率,单克隆试验检测各组细胞的克隆形成能力,细胞划痕试验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术试验检测细胞的凋亡情况,利用高通量测序技术,分析CNE1细胞转录组的变化,得到差异表达基因,筛选潜在基因靶点,采用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行验证.结果:CCK8结果显示,高丽槐素能显著抑制CNE1细胞的增殖,且具有时间和浓度依赖性(P＜0.05);与对照组比较,高丽槐素能抑制CNE1细胞的克隆能力和迁移能力(P＜0.05),且CNE1细胞克隆形成能力与迁移能力随着高丽槐素浓度的增加而减弱;Annexin V-FITC/PI染色结果显示,高丽槐素可使CNE1细胞凋亡率升高(P＜0.05);高通量测序结果显示,共有4 232个差异表达基因,表达程度显著升高的基因数有1 060个,表达程度显著降低的基因数有3 172个,高丽槐素可使抑癌基因(P53)、细胞周期依赖激酶抑制剂(P21)、成纤维细胞生长因子(Fgf2)、磷脂酰肌醇3-激酶(Pi3k)、丝裂原活化蛋白激酶8(Mapk8)等基因下调(P＜0.05);RT-qPCR显示高丽槐素能下调P53、P21、Fgf2、Pi3k、Mapk8mRNA表达水平(P＜0.05),检测结果显示与测序结果相一致.结论:高丽槐素可抑制CNE1细胞的增殖、克隆与迁移能力并促进细胞凋亡,其作用机制可能与P53、P21、Fgf2、pi3k、Mapk8等多组基因的转录变化有关.